实验避坑指南:Sybr Green I (10000X in DMSO)的应用领域及储存方式
化学性质:
高灵敏度:与双链DNA(dsDNA)结合后荧光信号增强800~1000倍。可检测低至20 pg的dsDNA,比传统溴化乙锭(EB)灵敏25-100倍。
线性范围广:荧光信号强度与dsDNA浓度呈线性关系,覆盖3-4个数量级动态范围。
低抑制性:稀释至工作浓度后,DMSO终浓度仅为0.01%,远低于PCR反应的抑制阈值。
多功能拓展:适用于qPCR、熔解曲线分析、琼脂糖凝胶电泳染色及毛细管电泳等。
基本参数:
中文名:SYBR Green I 荧光染料
英文名:Sybr Green I (10000X in DMSO)
激发波长:498 nm
发射波长:522 nm
规格标准:1mg、5mg、10mg
试剂厂家:陕西新研博美生物科技有限公司
结构式:
使用方法:
1.qPCR检测:
使用前需将本产品混匀,使用DMSO或超纯水稀释至20X待用。
推荐终浓度为0.2X-1X。
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每0.1ml原液可进行约5万次20µl体系的qPCR反应。
注意调整镁离子浓度(比普通PCR高0.5-3mM)以抵消染料对PCR的抑制。
2.凝胶电泳染色:
点染法:取1μl原液加入1ml TE缓冲液或灭菌双蒸水,再加入6×DNA Loading buffer上样缓冲液1ml混匀,电泳时取1~2μl工作液和5μl电泳样品混匀后静置5min后直接上样。
胶染法:常规配置琼脂糖凝胶100ml,加热至融化,待温度降至50~70℃时加入10μl原液,待胶凝固后即可电泳。
相关应用:
实时荧光定量PCR(qPCR):用于基因表达差异分析、基因芯片等。
琼脂糖/聚丙烯酰胺凝胶电泳染色:用于核酸的荧光染色。
注意事项:
纯度标准95%+
保存建议:避免反复冻融,避光保存,储液应该立即使用,任何未用的溶液分装小份冷冻于 < -20
注意事项:仅用于科学研究
相关试剂(部分):
sulfo-Cyanine5.5 DBCO
Sulfo-Cyanine5-PEG3-Biotin
Cyanine 3 Tyramide
TAMRA-NHS
Sulfo-Cyanine7.5 carboxylic acid
Sulfo-Cyanine5 bis-NHS ester
TAMRA-Azide-PEG-Biotin
Cy7 dicarboxylic acid
Tetramethylrhodamine ethyl ester
Sulfo-Cyanine5 dUTP
disulfo-ICG-alkyne
Cyanine5 phosphoramidite
Cyanine3 tetrazine
Me-tetrazine-Disulfo-ICG
disulfo-ICG-carboxylic acid
6-FAM-Phosphoramidite
6-Carboxyfluorescein-PEG3-acid
本文整理分享来自于:陕西新研博美生物科技有限公司的冬冬小编
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